题目

手机高温、潮湿的环境非常适合细菌的生长，由大肠杆菌引起的食源性疾病日渐成为社会比较关注的公共卫生问题。为了了解手机上大肠杆菌的种类及分布情况，某兴趣小组进行了如下实验步骤。请进一步完善实验内容并回答相关问题：（1）实验步骤：①配制含有___________、水、无机盐的固体培养基，并在培养基中加人少量_________(使大肠杆菌菌落呈现黑色）；②从10名学生的手机正、反面采集样品，分别接种至灭菌的培养基上，在37°C恒温培养箱中培养24〜48h，选取_____________的菌落；③将接种针用_____________法灭菌后，将②中选取的菌落接种到_____________(填“固体”或“液体”)培养基，在恒温摇床上培养24h，使细菌大量繁殖；④用_____________法将③过程所获得的细菌接种到培养基上，分别统计菌落的种类和数目；⑤根据菌落的特征进一步鉴定大肠杆菌的类型。（2）上述实验步骤中，从用途看，①所用培养基属于______________培养基。（3）上述实验步骤④统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是________________。 答案：【答案】碳源、氮源 伊红一美蓝 黑色 灼烧 液体 稀释涂布（平板） 鉴别 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 【解析】培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。伊红-美蓝培养基常用来鉴别大肠杆菌，其原理是大肠杆菌能分解乳糖产生大量的混合酸，菌体带H+故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽，在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合。培养基按物理性质分可分固体培养基和液体培养基，固体培养基一般用于微生物的鉴别、分离和计数，液态培养基常用于扩大化生产，观察细菌运动。鉴定大肠杆菌用伊红美蓝培养基，根据用途划分，该培养基属于鉴别培养基。用稀释涂布平板法统计菌落数目时，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个细菌，但由于两个或多个细菌聚集在一起时长成的是一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，为了保证结果准确，一般选择菌落数在.30-300的平板进行计数。（1）①固体培养基除了含水、无机盐，还需加入碳源、氮源，为了能鉴别大肠杆菌，需要加入伊红一美蓝，它会使大肠杆菌菌落呈现黑色；②从10名学生的手机正、反面采集样品，分别接种至灭菌的培养基上，在37°C恒温培养箱中培养24〜48h，选取黑色的菌落；③将接种针用灼烧法灭菌后，将②中选取的菌落接种到液体培养基，在恒温摇床上培养24h，使细菌大量繁殖；④用稀释涂布平板法将③过程所获得的细菌接种到培养基上，分别统计菌落的种类和数目；⑤根据菌落的特征进一步鉴定大肠杆菌的类型。（2）上述实验步骤中，从用途看，①所用培养基属于鉴别培养基。（3）上述实验步骤④统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。

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