题目

为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行如图A所示的实验。（1）配制好的培养基灭菌通常可以使用__________________法。步骤③与步骤②中培养基成分的最大区别是__________________________________________________。这种培养基从功能上看属于_____________（(填选择或鉴别)培养基。（2）同学甲进行过程④的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示。该同学的接种方法是___________；推测同学甲用此方法接种时出现图B结果可能的操作失误是___________________________；在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_______________________。（3）同学乙也按照同学甲的接种方法进行了过程④的操作：将1mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接入0．1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、58和57。据此可得出每升样品中的活菌数为________________。这种计数方法得到的结果一般比实际值偏小，原因可能有________________________________________________________。（4）步骤⑤需要震荡培养其目的是提高培养液溶氧量，同时使___________________，提高营养物质利用率。（5）步骤⑤后取样测定石油含量的目的是_________________________。 答案：【答案】高压蒸汽灭菌 步骤③的培养基中石油是唯一碳源 选择 稀释涂布平板法 涂布不均匀 检测培养基平板灭菌是否合格 5．7×107 当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 菌体和培养液充分接触 筛选出分解石油能力最好的细菌 【解析】1、微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。2、分析图B：图B采用的是稀释涂布平板法，但涂布不均匀。（1）根据题意，要分离和纯化高效分解石油的细菌，配制好的培养基灭菌通常可以使用高压蒸汽灭菌法。图中步骤②是扩大培养来自被石油污染过的土壤中细菌，步骤③是利用添加石油扩大培养分解石油的细菌，步骤③与步骤②中培养基成分的最大区别是步骤③的培养基中石油是唯一碳源。这种培养基从功能上看属于选择培养基。（2）过程④是对分解石油的细菌进行分离，分析B图可知，分解石油的细菌在培养基表面分布较为均匀，说明同学甲进行过程④的操作中接种方法是稀释涂布平板法；图B中培养基表面左侧的菌落数目明显比右侧多，推测同学甲用此方法接种时出现图B结果可能的操作失误是接种时涂布不均匀；在接种前需随机取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格。（3）同学乙也按照同学甲的接种方法进行了过程④的操作：将1mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接入0．1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、58和57。据此可得出每升样品中的活菌数为（56+58+57）30．1×100×1000=5．7×107个。由于细菌会相互重叠，当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以导致统计的细菌数量往往比实际数目少。（4）步骤⑤需要震荡培养其目的是提高培养液溶氧量，同时使菌体与培养液充分接触，提高营养物质利用率。（5）步骤⑤后取样测定石油含量的目的是筛选出分解石油能力最好的细菌，其中石油剩余量最少的一组所含的细菌就是分解石油能力最好的细菌

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