题目

白僵菌可感染农业害虫，因而可用来防治农业害虫。由于白僵菌对草丁膦（一种除草剂）敏感，且杀死害虫的能力较弱，科研人员将Bar基因（抗除草剂基因）和毒蛋白基因导入白僵菌进行基因工程改造，流程如图所示：（1）从苏云金芽孢杆菌中获取的毒蛋白基因，可以通过________技术在体外大量扩增，与细胞内DNA复制过程相比，该技术的不同点有：_____________________（答出两点）。（2）图中形成重组质粒1时需要的限制酶是__________________；形成重组质粒2除了需要限制酶XbaⅠ外，还需要_____________酶。（3）将重组质粒2导入经________处理成为感受态的白僵菌，一段时间后用含有_________________的平板培养基进行筛选，获得含有Bar基因的重组白僵菌。（4）为了检测毒蛋白基因是否插入到受体细胞，可以采用_______________________ 技术检测。（5）为了判断重组白僵菌的杀虫效果，科研人员接下来应该__________________________。 答案：【答案】PCR PCR通过高温解旋，PCR使用的是热稳定DNA聚合酶（Taq酶），引物不同 NcoⅠ、BamHⅠ DNA连接 Ca2+（CaCl2溶液） 草丁膦 DNA分子杂交技术 将重组白僵菌喷涂在植物叶片上，再用此叶片饲喂害虫，记录单位时间内的害虫死亡的数 【解析】据图分析，图中首先利用NcoⅠ、BamHⅠ两种限制酶切割目的基因和质粒，然后再用DNA连接酶形成重组质粒1，利用两种限制酶切割可以防止目的基因和质粒自身连接；然后再利用XbaⅠ酶分别切割重组质粒1和Bar基因，再构建重组质粒2。（1）可利用 PCR技术在体外复制目的基因从而获得大量毒蛋白基因片段。而PCR技术与细胞内DNA复制的区别主要是PCR通过高温解旋，PCR使用的是热稳定DNA聚合酶（Taq酶），引物不同，先解旋后复制等。（2）据图分析，毒蛋白基因两端是NcoⅠ、BamHⅠ作用位点，因此需要Nco I、BamH I两种限制酶切割目的基因和质粒。然后再用DNA连接酶形成重组质粒1。然后再利用XbaI酶分别切割重组质粒1和Bar基因，再通过DNA连接酶构建重组质粒2。（3）将重组质粒2与用钙离子处理后处于感受态的白僵菌菌液混合进行转化，一段时间后，用含有草丁膦的平板培养基进行筛选，获得含有Bar基因的重组白僵菌。（4）检测毒蛋白基因是否插入到受体细胞，说明检测对象是基因，应用DNA分子杂交技术。（5）个体水平的检测，科研人员将重组白僵菌喷涂在植物叶片上，再用此叶片饲喂饥饿处理的害虫，记录单位时间内的害虫死亡的数，以判断重组白僵菌的杀虫效果。

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